அமெரிக்கன் ஜர்னல் ஆஃப் மருந்து விநியோகம் மற்றும் சிகிச்சை திறந்த அணுகல்

சுருக்கம்

நீரிழிவு நோய்க்கான சிகிச்சைக்கான கிளாஸ்-II மருந்து கிளிபிசைட்டின் பீட்டா சைக்ளோடெக்ஸ்ட்ரின் சிக்கலான வாய்வழி மேட்ரிக்ஸ் மாத்திரையின் இன்-விட்ரோ மதிப்பீடு

ராஜேஷ்

சுருக்கம்

ஹெலிகோபாக்டர் பைலோரி என்பது கிராம்-எதிர்மறை பாக்டீரியமாகும், இது இரைப்பை அழற்சி மற்றும் வயிற்றுப் புண்கள் உள்ள நோயாளிகளின் இரைப்பை சளிச்சுரப்பியில் இருந்து மார்ஷல் மற்றும் வாரன் ஆகியோரால் முதலில் தனிமைப்படுத்தப்பட்டது. ஹெலிகோபாக்டர் பைலோரி என்பது இரைப்பை சளிச்சுரப்பியில் நாள்பட்ட தொற்றுக்கு முக்கிய காரணமாகும், இது உலக மக்கள்தொகையில் 50% ஐ பாதிக்கிறது. சமீபத்தில், எச்.பைலோரி இரைப்பை புண்கள், சிறுகுடல் அழற்சி மற்றும் இரைப்பை அழற்சி போன்ற பிற சிக்கல்களை ஏற்படுத்துவதாகக் காட்டப்பட்டுள்ளது. இலக்கியத்தின் படி, எச். பைலோரி நோயால் பாதிக்கப்பட்ட நோயாளிகளில் கணிசமான பகுதியினர், இரைப்பை குடல் நோய்களை உருவாக்காமல் இருக்கலாம் மற்றும் நீண்ட காலத்திற்கு அறிகுறியற்றவர்களாக இருக்கலாம். மறுபுறம், நீண்ட கால நோய்த்தொற்றுகள் அடினோகார்சினோமா மற்றும் இரைப்பை லிம்போமா போன்ற நிலைமைகளின் அபாயத்தை உயர்த்துகின்றன.

பல ஆய்வுகள் எச்.பைலோரியை ஒரு இறுதிப் புற்றுநோயை உண்டாக்கும் முகவராக உறுதிப்படுத்தியுள்ளன. ஹெலிகோபாக்டர் பைலோரி நோய்த்தொற்றுடன் தொடர்புடைய இறப்பு விகிதம், பாதிக்கப்பட்ட 34 ஆண்களுக்கு 1 வழக்கு மற்றும் 60 பாதிக்கப்பட்ட பெண்களுக்கு 1 வழக்கு என மதிப்பிடப்பட்டுள்ளது. ஹெலிகோபாக்டர் பைலோரி அதிக அளவு யூரேஸை (முழு புரத எடையில் 10% - 15%) உற்பத்தி செய்கிறது, இது H. பைலோரியின் உயிர்வாழ்வதற்கும் நோய்க்கிருமி உருவாக்கத்திற்கும் தேவைப்படுகிறது. பல நொதிகள் யூரியாவிலிருந்து அம்மோனியா மற்றும் கார்பனேட்டை உற்பத்தி செய்வதன் மூலம் H. பைலோரியின் உடனடி சூழலின் அமிலத்தன்மையைக் குறைக்கின்றன. ஹெலிகோபாக்டர் பைலோரி யூரேஸ் என்பது 550 kDa மூலக்கூறு எடை கொண்ட ஒரு மல்டிமெரிக் என்சைம் ஆகும், இது UreA (29.5 kDa) மற்றும் UreB (66 kDa) ஆகிய இரண்டு தனித்தனி துணைக்குழுக்களிலிருந்து சேகரிக்கப்படுகிறது. சமீபத்தில், எச்.பைலோரி நோய்த்தொற்றுகளுக்கு எதிரான தடுப்பூசிகளின் வளர்ச்சியில் ஆராய்ச்சியாளர்கள் அக்கறை கொண்டுள்ளனர். பல்வேறு வேட்பாளர் ஆன்டிஜென்களில், UreB மிகவும் பயனுள்ளதாக கருதப்படுகிறது, ஏனெனில் சுத்திகரிக்கப்பட்ட UreB உடன் எலிகளின் நோய்த்தடுப்பு யூரியாவைப் போலல்லாமல் அதிக நோய் எதிர்ப்பு சக்தி மற்றும் பாதுகாப்பை அளிக்கிறது. நோய்த்தடுப்பு இலக்காக யூரேஸைத் தேர்ந்தெடுப்பது, சவ்வு புரதங்கள் பெரும்பாலும் நோயெதிர்ப்பு மறுமொழியை வெளிப்படுத்துகின்றன என்ற உண்மையை அடிப்படையாகக் கொண்டது. இந்த ஆய்வில், எபிடோப் மேப்பிங்கிற்காக அதிக செயல்திறன் கொண்ட கணிப்பு மென்பொருள் நிரலைப் பயன்படுத்தினோம். பி லிம்போசைட்டுகளின் பல குறிப்பிட்ட எபிடோப்கள், ஒன்றோடொன்று அமைந்துள்ளன, இந்த நிரல் UreB மரபணுவின் அமினோ அமிலத் துண்டைத் தேர்ந்தெடுத்தது. மேலும், ஆன்டிஜெனிக் துண்டு, எஸ்கெரிச்சியா கோலி BL21(DE3) விகாரத்தின் மறுசீரமைப்பு புரதமாக வெளிப்படுத்தப்பட்டு சுத்திகரிக்கப்பட்டது. இந்த ஆய்வு, தொடர்புடைய மென்பொருள் நிரல்களைப் பயன்படுத்தி, குறிப்பிடத்தக்க ஆன்டிஜெனிக் பண்புகளுடன் மறுசீரமைப்பு UreB (rUreB) துண்டின் ஒரு பகுதியை முன்வைப்பதை நோக்கமாகக் கொண்டுள்ளது.

2. குறிக்கோள்கள்

இந்த ஆய்வின் நோக்கம், E. coli இல் உள்ள மொத்த வரிசை மற்றும் வெளிப்பாட்டிற்குப் பதிலாக ஆன்டிஜெனின் இம்யூனோடோமினன்ட் எபிடோப்களைப் பயன்படுத்தி, H. பைலோரியிலிருந்து UreB இன் ஆன்டிஜெனிக் பகுதியை உள்ளடக்கிய ஒரு மறுசீரமைப்பு திசையன் வழங்குவதாகும். மேலும், தடுப்பூசி வேட்பாளராக அதன் ஆன்டிஜெனிசிட்டியைத் தீர்மானிப்பதையும், மனிதர்களில் எச்.பைலோரி நோய்த்தொற்றின் செரோலாஜிக்கல் நோயறிதலில் அதன் செயல்திறனை மதிப்பிடுவதையும் நோக்கமாகக் கொண்டோம்.

3. முறைகள்

3.1 பாக்டீரியா, பிளாஸ்மிட்கள் மற்றும் பிற உதிரிபாகங்கள் தயாரித்தல்

இந்த ஆய்வில், எச். பைலோரி, டிஸ்பெப்டிக் நோயாளிகளின் பயாப்ஸியில் இருந்து, வழக்கமான கண்டறியும் எண்டோஸ்கோபிக்கு உட்பட்டு வளர்க்கப்பட்டது. பயாப்ஸிக்கு முன், ஆய்வில் பங்கேற்பதற்காக அனைத்து நோயாளிகளிடமிருந்தும் தகவலறிந்த ஒப்புதல் பெறப்பட்டது. முந்தைய அறிக்கைகளின் கண்டுபிடிப்புகளின் அடிப்படையில் கலாச்சார நிலைமைகள் தீர்மானிக்கப்பட்டன. தனிமைப்படுத்தப்பட்ட பயாப்ஸி மாதிரிகள் ப்ரூசெல்லா அகர் (மெர்க், ஜெர்மனி) மீது வளர்க்கப்பட்டன, இதில் ட்ரைமெத்தோபிரிம் (5 µg/mL), வான்கோமைசின் (10 µg/mL), மற்றும் 5% செம்மறி இரத்தத்துடன் கூடுதலாக அம்போடெரிசின் பி (2.5 µg/mL) உள்ளன.

37 ° C (CO2: 10%) வெப்பநிலையில் 3 - 5 நாட்களுக்கு மைக்ரோ ஏரோபிலிக் நிலைமைகளின் கீழ் அடைகாத்த பிறகு, கிராம் ஸ்டைனிங், அத்துடன் ஆக்சிடேஸ், யூரேஸ் மற்றும் கேடலேஸ் சோதனைகள் உள்ளிட்ட வழக்கமான நுண்ணுயிரியல் சோதனைகள் மூலம் வளர்ந்த பாக்டீரியாக்கள் H. பைலோரி என அடையாளம் காணப்பட்டது. மேலும் மதிப்பீட்டிற்கு, நாங்கள் pET-32a மற்றும் pBSK திசையன்களைப் பயன்படுத்தினோம் (நோவஜென் இன்க்., அமெரிக்கா). மேலும், 6-ஹிஸ்டிடின் டேக் மற்றும் ஒரு N-டெர்மினல் T7 எபிடோப் டேக் உடன் இணைவு புரதங்களை உருவாக்க pET-32a திசையன் பயன்படுத்தப்பட்டது. இந்த கூடுதல் அமினோ அமிலங்கள் உற்பத்தி செய்யப்படும் புரதத்தின் எடையை 20 kDa வரை அதிகரித்தது. இந்த ஆய்வில், கட்டுப்பாடு என்சைம்கள் மற்றும் டிஎன்ஏ லிகேஸ் ஆகியவை ஃபெர்மெண்டாஸ் (லிதுவேனியா) இலிருந்து வாங்கப்பட்டன, மேலும் ஆரம்ப குளோனிங்கிற்கு ஈ. கோலி டிஹெச்5α ஸ்ட்ரெய்ன் (ஸ்ட்ரேடஜீன், அமெரிக்கா) பயன்படுத்தப்பட்டது. கூடுதலாக, மறுசீரமைப்பு pET-32a (pET-32a UreB) பாக்டீரியாவின் புரவலன் விகாரமாக E. coli BL21(DE3)pLysS (Novagen, USA) ஆக மாற்றப்பட்டது. வழக்கமான பாக்டீரியா கலாச்சாரத்திற்கு, நாங்கள் லைசோஜெனி குழம்பு (லூரியா-பெர்டானி குழம்பு, எல்பி; சிக்மா, அமெரிக்கா) பயன்படுத்தினோம். ஆம்பிசிலின் (100 µg/mL) மற்றும் குளோராம்பெனிகால் (34 µg/mL; Sigma, USA) உள்ளிட்ட தேவையான நுண்ணுயிர் எதிர்ப்பிகள் LB ஊடகத்தில் சேர்க்கப்பட்டன.

முடிவுகள்: பிசிஆரின் வரிசைமுறை முடிவுகள், யூரேபி மரபணு மறுசீரமைப்பு பிளாஸ்மிட்டில் குளோனிங் செய்யப்படுவதைக் குறிக்கிறது. புரதத்தின் உற்பத்தி ஐசோபிரைல் β-D தியோகலக்டோபிரானோசைட் (IPTG) மூலம் தூண்டப்பட்டது, மேலும் வெளிப்படுத்தப்பட்ட புரதம் Ni-NTA கிட் மூலம் டயாலிசிஸ் மூலம் சுத்திகரிக்கப்பட்டது. கூடுதலாக, 42 kDa மூலக்கூறு எடையுடன் கூடிய மறுசீரமைப்பு புரதம் மேற்கத்திய பிளாட்டிங்கில் உள்ள ஆன்டிபாடிகளால் அங்கீகரிக்கப்பட்டது.

முடிவு: ஆன்டிபாடிகளின் மதிப்பீடு, இம்யூனோஜெனிக் துண்டிற்கான உயர் ஆன்டிஜெனிக் பண்புகளைக் குறிக்கிறது, இது நோயெதிர்ப்பு உயிரியல் தகவல்களால் கணிக்கப்பட்டது. எனவே, H. பைலோரி மற்றும் பிற கண்டறியும் கருவிகளுக்கு எதிரான தடுப்பூசிகளின் வளர்ச்சிக்கு UreB மறுசீரமைப்பு புரதம் சரியான ஆன்டிஜெனாக இருக்கலாம்.