மரபணுக்கள் மற்றும் புரதங்களில் ஆராய்ச்சி திறந்த அணுகல்

சுருக்கம்

MyoD க்கு ஆன்டிபாடி மயோஜெனின் கரிம நிகழ்வு மற்றும் அக்ரின்-தூண்டப்பட்ட நரம்பியக்கடத்தி ரிசெப்டர் கிளம்ப் ஆகியவற்றைக் குறைக்கிறது

 எரிகா இ ஆண்டர்சன்1, டேவிட் எச் கேம்ப்பெல்2, கெல்லி எசெல்1, பால் ஆர் ஸ்டாண்ட்லி2 மற்றும் வேட் ஏ க்ரோ1

மயோஜெனிக் கட்டுப்படுத்தும் காரணிகளின் குடும்பம், அத்துடன் MyoD மற்றும் myogenin ஆகியவை மயோஜெனீசிஸ் மற்றும் ஒப்பந்தக்காரர் சந்திப்பு உருவாக்கத்தை வழிநடத்துகின்றன. Myogenin ஆர்கானிக் நிகழ்வு MyoD ஆல் செயல்படுத்தப்படுகிறது, மேலும் myogenin இன் அனைத்து செயல்பாடுகளிலும் ஒன்று ஒப்பந்ததாரர் சந்திப்பில் உள்ள நரம்பியக்கடத்தி ஏற்பியின் (AChR) கரிம நிகழ்வை செயல்படுத்துவதாகும். மோட்டார் நியூரான்கள் வளர்ச்சியில் தசை நார்களை நெருங்கும்போது அக்ரினை கட்டவிழ்த்து விடுகின்றன, இது தற்போதுள்ள ஏசிஎச்ஆர்களின் தொகுப்பை ஒப்பந்ததாரர் சந்திப்பு உருவாக்கத்தின் நிலைக்கு கொண்டு செல்கிறது. MyoD அல்லது myogenin க்கு புரதத்தை தொடர்ந்து வெளிப்படுத்துவது C2C12 தசை செல் கலாச்சாரத்தில் அக்ரின்-தூண்டப்பட்ட AChR க்ளம்பைக் குறைக்கிறது என்பதை நாங்கள் முன்பே மறுக்கமுடியாது. MyoD மற்றும் myogenin வளர்ச்சியில் நகர்வதை குறிப்பாக நிறுவுவதே எங்கள் நோக்கம். முறைகள்: C2C12 செல் கலாச்சாரங்கள் பரிசோதனை கையாளுதல்கள் மற்றும் MyoD மற்றும் myogenin, மற்றும் myogenin morpholino ஆகியவற்றிற்கான ஆன்டிபாடிகளுக்கு வெளிப்பட்டன. எண்டோ-போர்ட்டர் சோதனைக் கையாளுதல்களின் செல் அதிகரிப்பை மேம்படுத்தவில்லை. அக்ரின் தூண்டப்பட்ட ஏசிஎச்ஆர் கிளம்பில் புரதம் அல்லது மார்போலினோவின் தாக்கத்தை மதிப்பிடுவதற்கு ஏசிஎச்ஆர் கிளம்ப் மதிப்பீடுகள் செய்யப்பட்டன. புரதம் அல்லது மார்போலினோ வெளிப்பாட்டின் போது மேற்கத்திய புள்ளிகள் மயோஜெனின் கரிம நிகழ்வை அணுகுகின்றன. முடிவுகள்: மயோஜெனின் புரதத்தை எட்டு மணி நேரத்திற்குள் வெளிப்படுத்துவது மயோட்யூப்களில் அக்ரின்-தூண்டப்பட்ட AChR க்ளம்பைக் குறைக்கும் என்பதை இங்குள்ள முடிவுகள் நிரூபிக்கின்றன. சில சோதனைக் கையாளுதல்கள் மயோஜெனின் கரிம நிகழ்வை ஒரே நேரத்தில் குறைக்கும் AChR க்ளம்பில் குறைவதை நாம் முன்னரே மறுக்கமுடியாது. இந்த முடிவுகள், குறிப்பாக MyoD மற்றும் myogenin கான்ட்ராக்டர் சந்தி உருவாக்கத்தில் நகர்வதை நிறுவுகிறது. முடிவு: மயோஜெனின் கரிம நிகழ்வை செயல்படுத்தும் ஒரு பொறிமுறையின் மூலம் அக்ரின்-தூண்டப்பட்ட AChR க்ளம்பிற்கு MyoD இன்றியமையாதது என்று இந்த முடிவுகள் ஆலோசனை கூறுகின்றன, இதன் விளைவாக AChR ஆர்கானிக் நிகழ்வு செயல்படுத்தப்படுகிறது. கொத்து மற்றும் ஒப்பந்ததாரர் சந்திப்பு உருவாக்கம். டெட்ராமெதில் ரோடமைனுடன் (மூலக்கூறு ஆய்வுகள்) இணைந்த α-பங்கரோடாக்சின் பிணைப்பால் AChRகள் பெயரிடப்பட்டன. DM இல் எழுபத்தி இரண்டு மணிநேரம் இருக்கும் போது AChR களை லேபிளிடுவதற்கு 37 ° C வெப்பநிலையில் அரை மணி நேரத்திற்கு நச்சு உள்ள ஊடகத்திற்குள் கலாச்சாரங்கள் அடைக்கப்பட்டுள்ளன. கவ்ல் சீட்டுகள் வெப்பநிலை பாஸ்பேட் பஃபர் செய்யப்பட்ட உப்பு (பிபிஎஸ்) மூலம் மூன்று முறை துவைக்கப்பட்டது, பிபிஎஸ்ஸில் ஒரு ஜோடி பாராஃபோர்மால்டிஹைடு மூலம் பத்து நிமிடங்களுக்கு ஏற்றப்பட்டது, பிபிஎஸ் மூலம் மூன்று முறை துவைக்கப்பட்டது, குளிர்ந்த மர ஆல்கஹாலில் -20 டிகிரி செல்சியஸ் வெப்பநிலையில் ஐந்து நிமிடங்களுக்கு நீரேற்றம் செய்யப்பட்டு, உருப்பெருக்கி ஸ்லைடுகளில் பொருத்தப்பட்டது. வெக்டாஷீல்டு மவுண்டிங் மீடியத்தில் தெரியும் ஒளி (வெக்டர் லேபரட்டரீஸ்). AChR கிளஸ்டர்கள் அசோசியேட் இன் நர்சிங் IX70 ஒலிம்போஸ் தலைகீழ் உருப்பெருக்கியுடன் 20X நோக்கத்திற்குக் கீழே காட்சிப்படுத்தப்பட்டது (200X இன் முழுமையான உருப்பெருக்கத்தை அளிக்கிறது), அசோசியேட் இன் நர்சிங்ட் ஃப்ளோரசன்ட் படங்கள் Magnafire டிஜிட்டல் இமேஜிங் கேமராவுடன் உயர் தெளிவுத்திறன் கொண்ட JPG கோப்புகளாகப் பிடிக்கப்பட்டன.ஃப்ளோரசன்ட் படங்களில் மயோட்யூப்களின் அனைத்து அம்சங்களிலும் AChR களின் பிரகாசமான கொத்துகள் கண்டுபிடிக்கப்பட்டன. ஒவ்வொரு கிரேஸ்கேல் படமும் தவறான சிகிச்சை செல் ப்ரொஃபைலரின் பொருள் அடையாள சூத்திரம் பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டது. ஃபார்முலாவில் பயன்படுத்தப்பட்ட விளிம்பு கோடிட்டுக் காட்டப்பட்டது, ஏனெனில் ஒரு பெல் ஒரு கிளஸ்டரின் ஒரு பகுதியாக கணக்கிடப்பட வேண்டிய குறைந்தபட்ச ஒளிரும் தீவிரம். விளிம்பில் உள்ள சோதனையானது, எழுபதாவது குறைந்தபட்ச பிரகாசம், ஒரு கிளஸ்டரின் ஒரு பகுதியாகக் கணக்கிடப்படுவதற்கு போதுமான புலப்படும் ஒளியைக் கொண்ட ஒரு பெல்லைக் கோடிட்டுக் காட்டியது, மேலும் இந்த வரம்பு அனைத்து பகுப்பாய்வுகளுக்கும் பயன்படுத்தப்பட்டது. உறுதியான ஒலி தீர்ப்பு மற்றும் நிலையான அளவீடு செய்ய, விளிம்பு மற்றும் ஒவ்வொரு மாற்று அமைப்புகளும் அனைத்து அணிகள் மற்றும் படங்கள் முழுவதும் உடைக்கப்படாமல் மாறாமல் இருந்தன. மயோஜெனிசிஸ் முழுவதும் வரிசை செயல்படுத்தும் மாதிரிகள், MyoD ஆல் மயோஜெனின் செயல்படுத்துவதில் தொடங்கி மரபணுக்கள் தொடர்ச்சியாக இயக்கப்படும் என்று கணித்துள்ளது. மயோஜெனிக் வேறுபாட்டிற்கான ஆரம்ப ப்ளூபிரிண்ட் நர்சிங் அசோசியேட் ஒருங்கிணைந்த மரபணு-அளவிலான டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் சிக்கல் பிணைப்பு மற்றும் வெளிப்பாடு அடையாளப்படுத்துதல் ஆகியவை வகுப்பு தசை செல்களில் உள்ள மயோஜெனிக் வேறுபாடு திட்டத்தை அதிக தெளிவுபடுத்துகின்றன. மயோஜெனிக் கட்டுப்படுத்தும் காரணிகள் மயோஜெனீசிஸ் மற்றும் ஒப்பந்ததாரர் சந்திப்பின் அசெம்பிளியை இயக்குகின்றன. குறிப்பாக, வளர்ந்து வரும் மயோபிளாஸ்ட்களில், சந்தி விவரக்குறிப்பு மற்றும் ஒப்பந்தக்காரரில் சம்பந்தப்பட்ட மரபணுக்களை MyoD குறிவைக்கும் ஆரம்ப வரைபடமானது மறுக்க முடியாதது.
முக்கிய வார்த்தைகள்: AChR; அக்ரின், C2C12; வரிசை வெளிப்பாடு; MyoD; மயோஜெனின்; ஒப்பந்ததாரர் சந்திப்பு.